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질문 Transfection 효율 높이는 방법
작성자 lugensci
작성일자 2016-04-22
요즘에 많은 Transfection Reagent들이 나오는데요 홍보물을 보다보면 serum유무와 상관없이 된다는 Reagent들이 있습니다.
원래 효율이 좋은 몇몇 cell line(Hek293,HELA,Cho..등등)에서만 가능한것입니다.


1. 일반적으로 serrum media & antibiotics를 첨가하게 되면 Transfection을 하는동안 cell의 투과성이 증가하기 때문에 antibiotics들이 cell에 많이 들어가게 됨으로써 cell death를 일으키키 때문입니다.


2. Ratio Volume(DNA:Transfection reagent)을 잘 조절 하는것도 중요합니다.
  각각의 cell type에 따라 성질이 다르게 때문입니다.


3. DNA Purity에 따라 세포의 독성을 줄일수 있습니다. DNA자체만으로도 독성을 일으키키 때문입니다.


4. 평소에 Transfection이 잘되던 cell들이 갑자기 잘 안되는경우는 Cell passage number 너무 오래되어서 캐릭터가 변할수도 있기때문입니다.


5. Transfection시 pi-petting에 주의 하셔야 합니다. 왠만하면 plate에 첨가하실때 벽면을 따라 흘려서 섞어주시는게 좋습니다.  과도하게 주입을 하게 되면 산화되는 경우가 있습니다.

*참고사항*
Transfection시 메뉴얼을 보시면 media total volume이 나옵니다.
만약에 6well 기준으로하여 토탈볼륨이 2ml이면 media양을 1ml 또는 1.5ml정도로 줄여서 Reaction time을
기존6hr을 추천한다면 4hr정도로 단축하여 하게된다면 효율이 좀더 높아집니다.
이 원리는 쉽게 말씀드리자면 세포와 Reagent의 근접거리를 좁혀줌으로써 세포의 활성도가 더 높아지기 때문입니다. 그럼 도움이 되시길 바랍니다^^
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